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File tradotto parzialmente. RICHIESTA DI TRADUZIONE a Natale Marzari
Dopo 41 anni e 5 mesi, nel maggio 2006 la magistratura di Trento ha riconosciuto l'esistenza e la gravità di quella malattia rara che nessuna altra istituzione o persona singola della provincia di Trento ancora mi riconosce, e per negare la quale mi perseguita.
 Natale Marzari

 CLINICHE LABORATORY

PROTOCOLLO ACIDO PERIODICO SCHIFF (PAS)

PRINCIPLE:

Questa colore è usati per the demonstration of glycogen. Tissue sezioni sono primi oxidized by periodic acid. The ossidativa process Risultano nei la formazione of aldehyde groupings through carbon-to-carbon bond cleavage. Free hydroxyl gruppi devono be presenti per ossidazione to take place. Ossidazione è completed when it reaches the aldehyde stage. The aldehyde gruppi sono detected by the Schiff reagent. A colorless, unstable dialdehyde composizione è formato e then transformato to the colored final produce by restoration della quinoid chromophoric ragruppante.

QUALITY ASSURANCE:

The Colorazione PAS con diastase o -amylase digestion ha histochemical specificità per glycogen. Skeletal muscolare normalmente contiene glycogen e è spesso recommended come a positive controllo tissue.

SPECIMEN REQUIRED: Snap frozen human striated muscolare. (Use the isopentano freezing method previously descritti.)

METHOD:

Fixation: Nessuno, use snap frozen tissue.

Tecnica: Cut 10 - 16 micron (12 µm) sezioni nei cryostat dal snap frozen biopsy. Attach uno o più sezioni to a No.1½, 22 mm square coverslip.

Equipment:
Ceramic colorazione rack - Thomas Scientific #8542-E40
Columbia colorazione dish - Thomas Scientific #8542-C12
Columbia colorazione dish (jar) - Thomas Scientific #8542-E30
Forceps
Latex gloves

Reagents:
Absolute alcohol (100% ethanol) - Quantum, FLAMMABLE store at room temp. nei a flammable cabinet
Glacial Acetic Acid -Fisher A507-500, CORROSIVE store at room temperature
Amylase - Sigma A-6505, store at room temperature
Chloroform - Baxter 049-4, FLAMMABLE CARCINOGEN store at room temperature nei a flammable cabinet)
Periodic Acid - Sigma P7875, store at room temperature
Permount - Fisher SP15-100, FLAMMABLE HEALTH HAZARD
Reagent alcohol, ACS - histological Fisher A962-4 o HPLC A995, FLAMMABLE, TOXIC,TERATOGENIC, store at room temperature In flammable cabinet
Schiff Reagent - Harleco 6073/71, store at room temperature
Xylenes - Fisher #HC700-1GAL, FLAMMABLE, store room temperature nei flammable cabinet)

Solutions:

I. Carnoy's Fixative (store at room temperature) PREPARE IN A FUME HOOD
Alcohol, 100 % 60 ml
Chloroform 30 ml
Glacial acetic acid 10 ml

II. Periodic Acid Solution, 0.5 % (w/v) PREPARE FRESH FOR EACH STAIN
Periodic acid 50 mg dissolved nei deionized acqua 10 ml

III. Alcohol 50 %
Reagent alcohol ~50 ml
Deionized acqua ~50 ml

IV. Alcohol 70 %
Reagent alcohol ~70 ml
Deionized acqua ~30 ml

V. Alcohol 80 %
Reagent alcohol ~80 ml
Deionized acqua ~20 ml

VI. Alcohol 95 %
Reagent alcohol ~95 ml
Deionized acqua ~ 5 ml

Staining Procedure:

  1. Place the coverslip con section nei a columbia colorazione dish (Thomas Scientific #8542- E40).

  2. Aggiunge Carnoy's fissativi to dish per 10 minuti.

  3. Rinse molto careinteramente con numerosi exchanges of deionized acqua. Sections può wash off!!

  4. Aggiunge Periodic Acid soluzione to colorazione dish per 10 minuti.

  5. Rinse molto careinteramente con numerosi exchanges of deionized acqua. Sections può wash off!!

  6. Aggiunge Shiff Reagent per 5 minuti

  7. Careinteramente wash con tre exchanges of tap o deionized H2O.

  8. Dehydrate nei ascending alcohol solutions (50%, 70%, 80%, 95% x 2, 100% x 2) nei columbia colorazione dish(jar)s - Thomas Scientific #8542-E30.

  9. Chiari con xylene (3 - 4 x ) quindi nei columbia colorazione dish(jar) - Thomas Scientific #8542-E30.

  10. Mount coverslip onto a labeled glass slide con Permount o alcuni altre suitable organico mounting medium

Risultati:

Glicogeno, neutral mucosubstances, membrana basale, collagen fibre, glycolipids e fosfolipidica will be dimostrato come pink to red to purple color.

Se diastase o -amylase è usati per a negative controllo, the glycogen depositi sono removed leaving solo the membrana plasmatica colorazione pink. The due major tipi delle fibre sono solitamente distinguished by different intensity of colorazione.

REFERENCES:

1. Thompson, Samuel W. SELECTED HISTOCHEMICAL AND HISTOPATHOLOGICAL METHODS, Charles C. Thomas, Springfield, IL, 1966.

2. Sheehan, D.C. e Hrapchak, B.B., THEORY AND PRACTICE OF HISTOTECHNOLOGY, 2nd Edition; Battelle Memorial Institute, Columbus, OH, 1987.

PREPARED BY G. JAMES PLANER 09/21/90
SUPERCEDES REVISION G. JAMES PLANER 06/30/95
REVISED BY KAREN BIESER 07/18/97
ADOPTED BY ALAN PESTRONK, M.D.
REVIEWED BY
REVIEWED BY
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